PCR实验室即基因扩增实验室,PCR实验室的分区规划怎么做?PCR实验室的建设设计要点有哪些?PCR实验室必须是单向走廊吗?走廊和传递窗是不是标配?上海
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一、PCR实验室建设设计要点
1.PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式。完成一组PCR实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还应增加样品粉碎过程。
①分散形式PCR实验室:
所谓分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。对于这种布置形式的PCR实验室建设设计,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无需特殊条件要求。
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②组合形式PCR实验室:
所谓组合形式PCR实验室,是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成独立实验区域的形式。对于组合形式PCR实验室的建设设计,由于各个实验间集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在入口处设缓冲间,以减少室内外空气交换。
①试剂配制室及样品处理室宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染;可以通过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。
②核酸扩增室及产物分析室应呈微负压,以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品,可以通过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。
③在理想情况下,PCR实验室缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内。PCR实验室进风由原有中央空调控制,要求将中央空调风口安装到指定定点,且高度为地面铺装好后2600mm处。
④如果使用荧光PCR仪,扩增室和产物分析室可以合并。若房间进深允许,可设PCR内部专用走廊。需要指出的是在减少室内外空气交换方面,缓冲间比专用走廊更有意义。
3.各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。
4.实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好;所有阴角宜采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
二、PCR实验室设计装修必须是单向走廊吗?走廊和传递窗是标配吗?
PCR实验室装修设计是一个考验专业性的设计装修项目,
CEIDI西递发现许多公司在进行设计时喜欢谁设置PCR走廊,但其实PCR走廊对于实验室装修设计来说并不是标配,尤其在建筑进深不够的时候千万不要硬做PCR走廊。(PCR实验室装修必须是单向走廊吗?)且PCR走廊会增加交叉污染。
传递窗的本质则同缓冲间,是物流的缓冲间。传递窗并非必须设置,但一般实验机构和实验人员为便于操作都喜欢设传递窗,其实只要不涉及洁污分流就不需要设传递窗。
三、PCR实验室的功能分区
1.PCR实验室的设计通常有四大分区:试剂储存和准备区、标本制备区、核算扩增区、产物分析区。这四个分区原本就不需要连接在一起,且在物理空间上必须是完全独立的,各区域无论在空间上还是在使用中,应处于完全的分隔状态,不能有空气的直接相通。
2. PCR实验室的功能区分布:
①PCR的用房分区可分散布置,可集中布置;集中布置的分布原则是依次排列、独立分区;4个基本分区可根据需要进行递增/减。如下为PCR实验室功能分区的常见布局
② 建筑上,缓冲间是阻隔空气交换的首要措施
③ 进入工作区域应严格按照单一方向进行,即:试剂储存和准备区——标本制备区——核算扩增区——产物分析区
3. PCR实验室功能区的压力控制:
① 压力梯度最好在10Pa及以上
②两种控制方式:系统控制和排风功率变化,系统控制即4个房间的压力控制应同时启停,排风控制即排风管道应分支,否则实验室停运时风流倒灌造成污染。
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四、PCR实验室的主要设备
①试剂准备区:仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等,加样器、天平除了要专用外,还应有定期校准。试剂分装应在超净台中进行,扩增反应混合液应使用分子生物学级的,试剂制备好后应有质检:一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。如下为PCR实验室的试剂准备和储存区:
②标本制备区:仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等。如下为PCR实验室的标本制备区
③扩增区:主要仪器是核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩增仪需进行校准。并配备UPS电源,以防止由于电压的波动,停电对扩增效果的影响。如下为PCR实验室扩增反映混合物配制和扩增区:
④分析区:主要仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等 洁净实验区的缓冲间部分面积不能超过主实验室的八分之一,这是有规定的。
五、PCR实验室装修工程的通风系统、压力控制、污染预防、安装条件
1.实验室空调通风系统设计及压力控制:
PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
2.污染的预防与控制:
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染,实验就必须停止,直到找到污染源为止,而且实验结果必须作废,需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐,浪费人力物力。因此要避免污染,首先应是预防,而不是排除。
3. 严格按照规范科学设计的安装流程:
安装前需要确定以下安装条件,如:电源电压,电源进线位置,电话网络线进线位置,进水水压,最小安装空间,地面平整度,通风孔、进水管和下水管的位置等,理想状态的空间尺寸和通风口尺寸。
六、PCR实验室装修建设后的管理
1. 严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门;
2. 尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。
3.扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源,废液不能在实验室中倾倒,必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理,如焚烧等;
4. 扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别注意实验人员的安全防护。
5. 完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净工作台、离心机、加样器等。
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